توضیحات
روش TA کلونینگ یک تکنیک پیشرفته در زمینه ساب کلونینگ است که بدون نیاز به آنزیم‌های محدودالاثر، فرآیند کلونینگ را سریع‌تر و ساده‌تر از روش‌های معمول انجام می‌دهد. این روش بر اساس توانایی طبیعی هیبرید شدن بازهای A و T در قطعات مختلف DNA عمل می‌کند، که این ویژگی را به یک ابزار موثر تبدیل کرده است.
در این فرآیند، قطعه ژنی مورد نظر با استفاده از آنزیم Taq DNA پلیمراز و تکنیک PCR تکثیر و تولید می‌شود. ویژگی منحصر به فرد Taq DNA پلیمراز این است که به دلیل عدم داشتن فعالیت تصحیح ‘۳ به ‘۵، معمولاً یک ‘۳- آدنین به صورت overhang در هر دو انتهای محصول PCR ایجاد می‌کند. این ویژگی به استفاده از نوکلئوتید A اضافی در انتهای ۳ پریم محصول PCR منجر می‌شود.
محصول PCR تولید شده سپس در وکتورهای خطی TA که دارای یک باز T چسبنده در دو انتهای توالی خود هستند، کلون می‌شود. این بازهای T چسبنده با بازهای A مکمل خود در محصول PCR تعامل می‌کنند و فرآیند کلونینگ را تسهیل می‌کنند. به این ترتیب، روش TA کلونینگ بر پایه اتصال نوکلئوتیدهای A و T در قطعات مختلف DNA انجام می‌شود و یک روش موثر و سریع برای کلونینگ محصولات PCR فراهم می‌کند.
وکتور Baran pUC-T نوعی وکتور مشتق از pUC است که برای اتصال مؤثر با محصولات PCR آماده استفاده می‌باشد. این وکتور حاوی توالی LacZα است که امکان انتخاب کلون‌های هدف را از طریق غربالگری کلنی‌های آبی و سفید فراهم می‌کند. محل‌های متعدد برش آنزیمی در کنار قطعات وارد شده، غربالگری کلون هدف را با استفاده از دو برش آنزیمی آسان می‌سازد. قطعات وارد شده همچنین می‌توانند با استفاده از پرایمرهای عمومی M13 forward و M13 reverse توالی یابی شوند.
