کیت سنجش مرگ برنامه ریزی شده سلولی یا آپپتوز

توضیحات

مرگ برنامه ریزی شد سلولی یا آپوپتوز یک فرآیند طبیعی فیزیولوژیکی است که طی تکامل جنینی و در حفظ هموستاز بافت‌ها رخ می‌دهد. آپپتوز سلولی به واسط چندین ویژگی مورفولوژیکی از جمله از برهم خوردن حالت نامتقارن بودن غشای پلاسمایی، متراکم شدن سیتوپلاسم و هسته، و بریدگی DNA  درون نوکلئوزومی شناسایی می شود. از دست دادن یکپارچگی غشای پلاسما یکی از نخستین اتفاقاتی است که رخ می دهد. در سلول‌های آپوپتوتیک، فسفاتیدیل سرین (PS) از لایه داخلی به لایه خارجی غشای پلاسمایی منتقل می‌شود.

پروتئین Annexin V، یک پروتئین با وزن مولکولی ۳۵-۳۶ کیلودالتون و وابسته به +Ca2، تمایل بالایی به PS دارد و به  PS سطح سلولی متصل می‌شود. Annexin V را می توان با فلورکروم‌های مختلف از جمله FITC کونژوگه کرد. این پروتئین حساسیت بالای خود را نسبت به PS حفظ می‌کند و به‌عنوان یک پروتئین حساس برای آنالیز فلوسایتومتری سلول‌های در حال آپوپتوز استفاده می‌شود.

رنگ‌آمیزی FITC Annexin V پیش از از دست دادن یکپارچگی غشایی است که با آخرین مراحل مرگ سلول ناشی از فرآیندهای آپوپتوتیک یا نکروتیک همراه است. بنابراین، رنگ‌آمیزی با FITC Annexin V معمولاً همراه با یک رنگ حیاتی مانند یدید پروپیدیوم (PI) یا 7-Amino-Actinomycin (7-AAD) استفاده می‌شود تا به محقق امکان شناسایی سلول‌های آپوپتوزی اولیه را بدهد.

سلول‌های زنده با غشاهای سالم PI را دفع می‌کنند، در حالی که غشاهای سلول‌های مرده و آسیب‌دیده به PI نفوذپذیر هستند. به عنوان مثال، سلول‌هایی که به عنوان زنده در نظر گرفته می‌شوند، FITC Annexin V و PI منفی هستند؛ سلول‌هایی که در مراحل اولیه آپوپتوز هستند، FITC Annexin V  مثبت و PI منفی هستند؛ و سلول‌هایی که در مراحل پایانی آپوپتوز هستند، هر دو FITC Annexin V و PI مثبت هستند. این آزمون بین سلول‌هایی که تحت مرگ آپوپتوتیک قرار گرفته‌اند و آن‌هایی که به دلیل یک مسیر نکروتیک مرده‌اند، تفاوتی قائل نمی‌شود؛ زیرا در هر دو حالت، سلول‌های مرده با FITC Annexin V و PI رنگ‌آمیزی می‌شوند. با این حال، زمانی که آپوپتوز در طول زمان اندازه‌گیری می‌شود، سلول‌ها می‌توانند از FITC Annexin V و PI منفی (زنده، یا بدون آپوپتوز قابل اندازه‌گیری)، به FITC Annexin V مثبت و PI منفی (آپوپتوز اولیه، یکپارچگی غشایی حفظ شده) و در نهایت به FITC Annexin V و PI مثبت (مرحله پایانی آپوپتوز و مرگ) مورد بررسی قرار گیرند. حرکت سلول‌ها در این سه مرحله نشان‌دهنده آپوپتوز است.